Un grand nombre de dosages -en particulier les analyses biologiques médicales- font appel à l'utilisation d'enzymes. En effet, les enzymes par leur grande spécificité et leur efficacité remarquable sont des outils de choix.
Deux types de conditions de dosage sont utilisées :
| · | lorsque le substrat de l'enzyme est transformé complètement et rapidement en produit , on peut faire un dosage en "point final" |
| · | lorsque l'enzyme utilisée a un Km relativement élevé, la réaction peut fonctionner dans les conditions d'ordre 1 par rapport au substrat (il faut que [S] soit < à Km/100) , on peut alors réaliser en dosage "en vitesse initiale". La vitesse initiale sera, dans ces conditions, directement proportionnelle à la concentration initiale du substrat présent. |
Les méthodes font souvent appel à l'utilisation conjointe de plusieurs enzymes. Pour l'utilisation courante dans les laboratoires d'analyses médicales ou agroalimentaires, les protocoles sont très standardisés et les produits nécessaires sont commercialisés sous forme de kits.
Pour être applicable, la méthode implique une réaction totale de transformation du substrat en produit.
La méthode consiste à transformer totalement le substrat en produit en présence d'enzyme(s) appropriée(s).
| Du fait de la simplicité d'utilisation, on utilise la plupart du temps une méthode spectrophotométrique. La variation d'absorbace entre le temps zéro (début de la réaction) et le temps t (réaction totale) est directement proportionnelle à la quantité de substrat transformé. |
Pour être applicable, la réaction doit fonctionner dans des conditions d'ordre 1 par rapport au substrat.
| Il est indispensable de réaliser un étalonnage de la méthode dans les mêmes conditions expérimentales que celles utilisées pour le dosage afin de vérifier que la condition "ordre 1 par rapport au substrat" est effectivement vérifiée. |
| Biochimie | Structurale | et | Analytiqueã | Danielle | et | Khanh | Lê-Quôc | 1999-2000 |